高效液相色譜系統(tǒng)因其高效、 快速、高峰容量的特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于藥物分析、生化分析、食品分析、環(huán)境分析等。高效液相色譜法的分離原理是：溶于流動(dòng)相中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，由于與固定相發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。又稱(chēng)為色層法、層析法。
HPLC是在經(jīng)典的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，其以液體作為流動(dòng)相，并采用顆粒較細(xì)的高效固定相的柱色譜分離技術(shù)。其分離機(jī)制與常規(guī)柱色譜相同，但填料更加精細(xì)，需高壓泵推動(dòng)，柱效高，分析速度快。與氣相色譜不同的是液相色譜中流動(dòng)相亦參與組分的分離過(guò)程，其組成、比例和pH值可靈活調(diào)節(jié)，分離模式多樣。在實(shí)際操作中主要通過(guò)改變流動(dòng)相的組成來(lái)調(diào)節(jié)樣品在色譜柱的保留值和選擇性，從而使不同樣品得到分離。
高效液相色譜系統(tǒng)的色譜法自20世紀(jì)60年代問(wèn)世以來(lái)，由于使用了高壓輸液泵、全多孔微粒填充柱和高靈敏度檢測(cè)器，實(shí)現(xiàn)了對(duì)樣品的高速、高效和高靈敏度的分離測(cè)定。高效液相色譜由于吸取了經(jīng)典液相色譜的研制經(jīng)驗(yàn)，并引入微處理機(jī)技術(shù)，較大的提高了儀器的自動(dòng)化水平和分析精度。現(xiàn)在用微處理機(jī)控制的高效液相色譜儀，其自動(dòng)化程度很高，既能控制儀器的操作參數(shù)(如溶劑梯度洗脫、流動(dòng)相流量、柱溫、自動(dòng)進(jìn)樣、洗脫液收集、檢測(cè)器功能等)，又能對(duì)獲得的色譜圖進(jìn)行收縮、放大、疊加，以及對(duì)保留數(shù)據(jù)和峰高、峰面積進(jìn)行處理等，為色譜分析工作者提供了高效率、功能齊全的分析工具。
高效液相色譜系統(tǒng)的色譜法應(yīng)用范圍十分廣泛，對(duì)樣品的適用性廣，不受分析對(duì)象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，幾乎所有的化合物包括高沸點(diǎn)、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用高效液相色譜法分析測(cè)定，因而彌補(bǔ)了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機(jī)化合物中，可用氣相色譜分析的約占20% ，而80%則需用高效液相色譜來(lái)分析。HPLC因其具有分離效能高、分析速度快、檢測(cè)靈敏度好、能分析和分離高沸點(diǎn)且不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、藥物及臨床分析，世界各國(guó)己將該法收載于藥典。
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