色譜柱的分離原理及作用機(jī)理

　　色譜柱適用于分析蛋白質(zhì)多肽等生化樣品。它柱效高，柱壓低，經(jīng)久耐用，代表性地反映了對(duì)產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程的分步嚴(yán)格控制。且所選擇的硅膠是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)量監(jiān)測(cè)的合格產(chǎn)品，粒度分布窄，顆粒表面均勻光滑，因而色譜柱柱效高，柱壓卻很低，并進(jìn)一步延長(zhǎng)了其使用壽命。
 

　　一、色譜柱的分離原理：采用反相流動(dòng)相體系，而按照正相順序出峰。通過(guò)親水性相互作用，可有效的分離反相色譜柱中因保留能力弱而難分離的強(qiáng)極性化合物。是一種分離機(jī)理，而具備這種分離機(jī)理的鍵合相種類非常多。在HILIC中，固定相是極性的，流動(dòng)相中的水相部分表現(xiàn)為強(qiáng)洗脫溶劑，這與傳統(tǒng)的反相色譜法*相反。
 

　　二、色譜柱的作用機(jī)理：
 

　　可以被認(rèn)為是反相液相色譜通過(guò)采用極性固定相來(lái)運(yùn)行的。采用的流動(dòng)相是含有少量水/緩沖鹽或其他極性溶劑的高比例有機(jī)相。流動(dòng)相中的水形成一個(gè)富水層被吸附在固定相表面，極性物質(zhì)首先進(jìn)入富水層得到保留。極性化合物是通過(guò)一個(gè)復(fù)雜的混合模式被保留的，包括：富水層和流動(dòng)相之間的親水分配、極性官能團(tuán)和固定相間的氫鍵作用以及離子官能團(tuán)的靜電作用。當(dāng)然，親水分配是主要的保留模式。從保留機(jī)理來(lái)看，HILIC和反相色譜柱是有著非常大的差別的。